放射性125I粒子对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤生长抑制及细胞凋亡机制研究

目的 探讨放射性¹²⁵I粒子对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤生长抑制及细胞凋亡机制。方法 体外培养人肺腺癌A549细胞,构建BALA/c裸鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤长到（300±50）mm³时,将40只荷瘤小鼠采用随机数表法分成4组,分别为空源粒子组（0 mCi组）、0.6和0.8 mCi（1 Ci=3.7×10¹⁰ Bq）组和空白对照组,每组10只。将放射性活度为0、0.6和0.8 mCi的¹²⁵I粒子分别植入裸鼠移植瘤内,空白对照组不作任何处理。每4天定期测量裸鼠体重,共观察32 d。粒子植入移植瘤32 d后处死裸鼠,称量移植瘤质量,绘制裸鼠体重增长曲线。切取瘤组织采用苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织病理学变化;末端脱氧核苷酸转移酶-生物素dUTP切口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡;用免疫组织化学法检测凋亡因子P21、Caspase-9、Survivin、Livin蛋白的表达。结果 各组裸鼠无死亡。在放射性粒子植入的第28和32天,0.6和0.8 mCi组裸鼠体重明显小于空白对照组,差异有统计学意义（q=4.26、9.19、4.11、11.59,P<0.05）。0.6和0.8 mCi组瘤体质量均小于空白对照组（q=5.021、5.692,P<0.05）,抑瘤率依次约为49%和62%,而0 mCi组瘤体重与空白对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。0.6和0.8 mCi组瘤细胞大量变性坏死,0 mCi组与空白对照组的瘤细胞排列紧密,未见明显坏死。0.6和0.8 mCi组的凋亡指数明显增加,分别为（50.00±2.58）%和（62.33±4.51）%,与空白对照组（27.00±4.69）%比较,差异均有统计学意义（q=14.957、10.918,P<0.05）。P21和Caspase-9蛋白在0.6和0.8 mCi组的表达比空白对照组明显增加,差异有统计学意义（χ²=11.380、24.310、11.380、20.376,P<0.05）。Survivin和Livin蛋白在0.6和0.8 mCi组的表达比空白对照组明显减少（χ²=9.643、23.254、15.429、26.667,P<0.05）。结论 放射性¹²⁵I粒子可以抑制肿瘤细胞的增殖,并可能通过上调P21和Caspase-9表达、下调Survivin和Livin表达促进A549细胞的凋亡。     

溶瘤病毒H101联合照射对人肺腺癌细胞系A549凋亡及毒性的研究

目的 探讨溶瘤病毒（H101）与射线对人肺腺癌细胞系A549凋亡及毒性的影响。方法 体外培养人肺癌细胞系A549,取对数生长期的肺癌细胞,分为对照组（PBS）、单纯照射组（IR组）、溶瘤病毒组（H101组）、照射联合溶瘤病毒组（IR+H101组）。采用膜联蛋白异硫氰酸荧光素/碘化丙锭（Annexin V-FITC/PI）进行双染,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测各组细胞毒性;用实时荧光定量RT-PCR检测H101表面衣壳蛋白Hexon mRNA表达并比较病毒复制情况。结果 H101组细胞凋亡率（55.37%）与对照组细胞凋亡率（1.03%）比较,差异有统计学意义（t=36.51,P<0.05）;IR+H101组细胞凋亡率（93.06%）与H101组（55.37%）、IR组（12.67%）以及对照组（1.03%）比较,差异均有统计学（t=13.51、24.14、38.99,P<0.05）;与对照组比较,IR组和H101组在各个时间段的细胞LDH释放百分比差异有统计学意义（t=25.84、39.38、32.51、78.18,P<0.05;t=31.40、2.68、23.43、60.98,P<0.05）;IR+H101组细胞LDH释放百分比与对照组比较（t=80.71、119.74、109.80、123.94,P<0.05）、IR组（t=28.80、54.34、72.34、61.91,P<0.05）和H101组（t=42.02、57.45、57.01、58.83,P<0.05）,差异均有统计学意义;与H101组比较,IR + H101组Hexon的mRNA表达量在24、48和72 h分别增长了16.26、28.37和39.58倍,差异有统计学意义（t=54.50、33.73、29.28,P<0.05）。结论 H101对肿瘤细胞具有放射增敏作用,同时射线也增强了H101的溶瘤作用,两者联合协同互补对肿瘤细胞起到杀伤作用。     

放射性125I粒子植入对人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响

目的 探讨放射性¹²⁵I粒子植入对人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响及其作用机制。方法 制备人肺腺癌细胞A549裸鼠皮下移植瘤模型24只,采用随机数字表法分为4组,每组6只,0、22.2、29.6 MBq组和对照组。用18 G植入针在各组裸鼠瘤体内分别植入放射活度为0、22.2和29.6 MBq ¹²⁵I粒子,每个移植瘤内植入一枚,对照组不予处理。观察肿瘤生长情况,每4天测量肿瘤大小。30 d后处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线。瘤组织免疫组织化学S-P法检测微血管密度（microvascular density,MVD）,并分别用RT-PCR、Western blot法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的mRNA及蛋白的表达。结果 粒子植入治疗后54 d,22.2、29.6 MBq组移植瘤体积明显小于对照组（q=14.117、17.075,P<0.05）,但0 MBq组与对照组、22.2与29.6 MBq组瘤体积差异均无统计学意义（P>0.05）。CD34阳性染色结果显示,22.2 MBq组的MVD为522±119,29.6 MBq组为491±121,明显低于对照组的922±260（q=4.826、5.197,P<0.05）,但0 MBq组与对照组、22.2 MBq组与29.6 MBq组差异均无统计学意义（P>0.05）。RT-PCR检测表明,22.2 MBq组的VEGF和HIF-1α mRNA相对表达量分别为0.279±0.0659和0.370±0.0857,29.6 MBq组为0.215±0.0620、0.278±0.0651,均低于对照组（q=18.881、17.211和15.376、14.733,P<0.05）,但0 MBq组与对照组、22.2 MBq组与29.6 MBq组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果显示,22.2 MBq组与29.6 MBq组瘤组织VEGF和HIF-1α蛋白表达均明显减少,与对照组相比,差异有统计学意义（q=5.848、6.263和6.560、7.576,P<0.05）,但0 MBq组与对照组以及22.2 MBq组与29.6 MBq组差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 放射性¹²⁵I粒子植入能有效抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成。